Splatoon 3 zawiera trzy główne tryby: Turf War, kultowa drużynowa bitwa czterech na czterech polegająca na pokolorowaniu największej ilości terenu; Salmon Run, tryb kooperacyjny, w którym czteroosobowa drużyna wspólnie odpiera fale niebezpiecznych bossów Salmonidów, aby zebrać złote jaja; oraz świeżutki tryb fabularny dla jednego gracza, zawierający kampanię „Return of the Mammalians“, która stawia graczy w roli Agenta 3 w walce ze złymi Octarianami. Ponadto do serii powracają regularne wydarzenia dla wielu graczy, zwane Splatfestami.